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二維膠體電泳 (2D gel electrophoresis, 2-DE)

一般用於檢測蛋白質是否存在的方法有很多種,而蛋白電泳法是最常被使用的方法之一。

此方式可依據蛋白質不同的物理性質,包含大小、電荷、以及等電點來進行分離。

 

蛋白質電泳又可分為 :

一維膠體電泳 (SDS-PAGE) : 此方式是依照不同分子量的蛋白質在膠體中移動的速度不同來分離。此方式是最常被用來偵測蛋白質的方法。

二維膠體電泳(2D gel electrophoresis, 2-DE) : 則是將複雜蛋白質樣品依照帶電量 (isoelectric focusing, IEF) 以及分子量 (SDS-PAGE) 的不同,來進行兩個不同方向的分離。此方法分離的效果最好。

 

蛋白質電泳優缺點比較

二維電泳應用

 Protein Separation : 比較病人以及正常人蛋白表現差異

 

Protein Identification by MS : 使用質譜鑑別蛋白

鑑別蛋白使用 2D 搭配 MS ,可以讓原本較複雜的樣品,先單純化後再鑑別,可增加比對的準確度

J Electrophoresis 2020; 64:13

 

Phosphorylation : 磷酸化蛋白分析

使用傳統的 2D 實驗難以分辨磷酸根單位點的差異

Data by: Prof. Norie Araki, Department of Tumor Genetics and Biology, Kumamoto University Hospital 熊本大学医学部附屬病院

 

 

Host Cell Protein Detection : 以2DE 來當作 ELISA 驗證工具

在生物製劑製造過程所引起的殘留宿主細胞蛋白雜質,此雜質會引發患者免疫原性反應並降低藥物療效。

日、歐及美國藥典說明 : 用於生物製藥產品製造的 HCP 檢測方法及驗證指南,關於抗體驗證的部分,二維電泳法被建議用於作為校正標準品的抗原或用於多株抗體生產的免疫原定性分析驗證。