Western blot 西方墨點法
一般檢測蛋白質含量的變化以 Western blot 為實驗室最常使用的技術之一。
步驟大致為樣品製備 (Sample prepare)、蛋白質電泳 (electrophoresis ; SDS-PAGE)、轉漬 (transfer)、
抗體反應 (antibody incubation) 到螢光/冷光偵測 (fluorescent/ Chemiluminescent detection)。
Merck Millipore 憑藉著持續創新且提供穩定品質協助客戶發表 Western blot data 十餘年。
提供全步驟系列產品，協助您穩定快速發表，高專一性與低背景值的實驗結果。
I. 樣品製備 Protein extraction and purification
蛋白質萃取套組 Protein extraction kit
可萃取細胞質 (cytoplasma)、細胞核 (nuclear)、細胞膜 (membrane) 、細胞骨架 (cytoskeleton) 、粒線體 (Mitochondria) …等多種套組選擇，操作快速且穩定無汙染。
純化蛋白質 Purify Proteins
純化蛋白質可藉由免疫沉澱法 (Immunoprecipitation, IP)，利用抗體與抗原結合，分離出目標蛋白質。目前廣泛使用的有兩種形式：
- 瓊脂糖 (agarose beads / resin)：較高的抗體結合力、需靠離心協助但會造成樣本流失較多
- 磁珠 (magnetic beads)：抗體僅能接在磁珠表面、需要靠磁座協助，因此樣品回收率較高。
默克提供 PureProteome™ magnetic beads or agarose beads 兩種系統，確保快速有效的分離目標蛋白質，有 nickel、protein A、protein G 以及官能基可供選擇。
II. 蛋白質電泳
Merck 提供一系列蛋白質電泳所需的 buffer 、 chemical、detergent… 以及電泳和鑄膠全系列產品等。
mPAGE® 鑄膠台
#怎麼配都不漏！
mPAGE® Mini Gel電泳槽
#怎麼裝都不漏！
mPAGE® Mini Wet Transfer 轉漬槽
#Millipore®「膜」門世家！
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mA400基礎款電源供應器
#電泳轉漬一台搞定
III. 轉漬
PVDF 膜有著易操作、抗溶劑能力與蛋白質吸附力強的特性，因此蛋白質訊號強且靈敏度高。NC 膜不須浸泡甲醇，但膜材較軟，不適合進行 re-Blot。
Merck Millipore 提供四款 PVDF 膜以及一款 NC 膜，提供您在不同的需求下得到最適合的選擇：
Immobilon®-E membrane (0.45µm)
不須使用醇類做活化，可用來取代 NC。Immobilon®-P membrane (0.45 µm)
適用於大多數的蛋白。Immobilon®-PSQ membrane (0.2 µm)
適用於蛋白質定序以及小分子量蛋白質。Immobilon®-FL membrane (0.45 µm)
適用於螢光系統偵測。Immobilon®-NC Transfer Membrane (0.45 µm)
不須使用醇類做活化，適用大多數的蛋白。
此外亦有提供符合 Mini gel 或 Midi gel 大小的 Immobilon® NOW 系列新產品。此系列產品為盒式捲的包裝，方便裁切並可避免因為剩餘邊緣過小無法使用而造成的浪費。
IV. Blocking Reagents
在 Western blotting 實驗中，會利用阻擋膜上非專一性結合位來提升抗體與目標蛋白質的專一性結合，防止過高的背景值產生。
Bløk® reagent 系列產品為非蛋白質來源，是以化學薄層附著來降低非專一性背景值，提供高效穩定的封閉效果。
一般常用款
Immobilon® Block – CH (Chemiluminescence)
磷酸化蛋白專用款
Immobilon® Block – PO (Phosphoprotein)
螢光偵測款
Immobilon® Block - FL (Fluorescent)
V. 抗體反應
- 熱賣的 Internal control ( Housekeeping gene )：actin、GAPDH、tubulin … 等。
- 熱賣的二抗：Goat anti-mouse-HRP、Goat anti-rabbit-HRP、Goat anti-human-HRP… 等。
VI. Protein detection
化學冷光 Chemiluminescent detection : 當受質 (substrate) 和帶有 HRP 的抗體結合後會發出可見光的原理，接著在影像系統中即可偵測到目標蛋白的訊號。
熱賣款
Immobilon Western Chemiluminescent HRP Substrate
創新款
Merck Millipore 提供三種強度預混式 ECL reagent：Luminata™ Western HRP Substrates (Classico、Crescendo、Forte)