Immunohistochemistry 免疫組織化學染色法
免疫組織化學染色法 (immunohistochemistry, IHC) 是指利用抗體與抗原間專一性結合,來偵測組織中目標蛋白的表現量及位置的一種技術。
只要是能夠讓抗體結合的物質,也就是具有抗原性的物質包括蛋白質、核酸、多醣、病原體等都可偵測。
免疫組織化學染色的優點在於專一性、高靈敏度、快速簡便及成本相對較低,所以廣泛地被使用在基礎研究以及臨床病理檢測。
在臨床上可藉由特定的腫瘤標記來做癌症篩選,因此免疫組織化學染色法在基礎醫學研究、預防及診療上都扮演相當重要的角色。
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I. 組織處理
固定液
Paraformaldehyde、Glutaraldehyde
脫水 (Dehydration)
Neo-Clear (不含Xylene)、Sucrose
包埋
Histosec without DMSO (Paraffin embedding medium) 及有含 DMSO 兩種
脫鈣 (Decalcification)
Osteomoll & Osteosoft
II. 染色前步驟
脫蠟 (Dewaxing)
Neo-Clear (不含Xylene)、Xylene
抗原修復 (Antigen retrieval)
Citrate Buffer 、Sodium Citrate、Proteinase K
去除內生性過氧化酶
Hydrogen peroxide 30%
使用 Blocking buffer 阻斷非專一性蛋白的結合
III. 染色
使用一級抗體和二級抗體作染色
默克提供多種IHC 專用一級和二級抗體,高專一性、選擇性多、文獻引用數高
IV. 呈色
最後加入呈色劑讓酵素分解,產色色素沉澱。色素的位置,就是偵測抗原的所在位置。IHC Select
V. 脫水、封片保存
脫水 (Dehydration)
Neo-Clear (不含 Xylene)、Sucrose
封片
Entellan® new
ImmunoPen
檢體周圍形成疏水圈,節省抗體擴散的浪費