ZetaView - Nanoparticle Tracking Analyzer

 

 

ZetaView 為 Nanoparticle Tracking  Analysis (NTA) 機器,透過高解析的 CMOS 攝影機記錄奈米顆粒移動的速度、路徑,利用電腦分析其布朗運動 (Brownian motion) 和微電泳實驗 (Micro-electrophoresis),可得顆粒大小、顆粒濃度、Zeta Potential 等資訊。

Scanning NTA 

自動偵測樣品槽內 11 個不同平面之顆粒特性

Auto-alignment

軟體操作可自動進行調整及對焦,減少操作時間及降低人為調整誤差

Fast measurement 

於 60 秒中偵測超過 1,000 顆顆粒

Quick and simple cleaning 

內建 pump 系統,由軟體操作進行樣品槽清洗,減少樣本與樣本間偵測之時間

Intuitive software 

直覺式軟體介面設計,易於切換各種偵測模式。

Compact all-in-one design 

單一機器即可進行多種顆粒特性偵測及分析

Fluorescence analysis 

切換螢光偵測模式及置入螢光濾片即可進行螢光訊號偵測

No high-cost consumables 

僅需準備針筒進行樣品注入

No calibration 

顆粒大小偵測無須進行機器校正

 

1 個樣品可得 5 個實驗結果

  • 顆粒大小
  • 顆粒濃度
  • Zeta Potential
  • 子族群分析
  • 螢光染色分析

 

Bio-nanoparticles

 

 - Extracellular Vesicles (EVs)

 - Exosomes

 - Liposomes & Micelles

 - Protein Agglomerates

 - Viruses & Virus-Like-Particles (VLPs)

 - Drug Delivery

 - Fluorescent-labelled NPs

 

Low concentration samples

 

 - Nanobubbles

 - Trace Particles

 



  ZetaView Start-up 操作影片  


  NTA 機器比較 - ZetaView 與 NanoSight  

NTA (Nanoparticle Tracking Analyzer) 藉由偵測粒子大小和濃度,可以被用來確認 EVs (extracellullar vesicles)的特性。近期科隆大學研究團隊發表了一篇文章:Extracellular vesicle measurements with nanoparticle tracking analysis - An accuracy and repeatability comparison between NanoSight NS300 and ZetaView,比較了兩台 NTA 機器。

 

主要比較的是 (1) 粒子於液體中的濃度 (2) 粒子的大小,他們的精確度與正確度 (註:精確度 precision,表示做三重複時的一致性,用 % CV 計算,數值越高表示越不精確;正確度 accuracy,表示與真實結果的差異性,用 % BIAS 計算,數值越高表示與真實結果差異越大。)

 

如下圖,使用了兩種材質的標準粒子 (左:polystyrene。右:silica),他們的大小和濃度都是已知的 (黑色虛線)。三重複中的三個點越平行越接近,表示重複性越高越精確;而測得數值越接近黑色虛線,表示正確度越高。圖A為濃度結果,可以發現 ZetaView (藍正方框)測得結果與兩種材質標準粒子幾乎一樣,且三重複結果都相同。圖 B 為大小結果,ZetaView 測得結果較實際大小還大,但仍有較好的重複性。

 

接著直接進行生物樣本 liposome 和 EVs 的偵測。由於生物檢體的粒子濃度是未知的,所以濃度測定上只比較精確度;但是大小可以利用穿透式電顯 (TEM) 來做基準,所以仍有黑色虛線做正確度比較。圖 A 由上至下分別是 liposome、來自 serum 的 EVs 及來自 culture medium 的 EVs,它們的濃度測定。圖 B 則是大小測定。綜合結論同上,即 ZetaView 有較高的重複性,而大小則有高估的情形。

 

最後,它們將如上的三種生物檢體做序列稀釋,理論上經過序列稀釋的濃度會如同圖 A 的實線一樣,而實際測得結果用虛線表示,R2 越接近 1 表示越接近實線的結果。結果顯示 ZetaView (藍線)較接近實際結果,即 R2 接近 1。而圖 B 中表示,無論樣本怎麼稀釋,大小應該都要一致,ZetaView 表現出較高的一致性。

 

結論

  1. ZetaView 提供較準確的濃度測定。Nanosight 會高估 2 倍左右之濃度。
     
  2. ZetaView 每次偵測的重複性極高
     
  3. ZetaView 偵測大小有高估的情形。而關於大小高估問題,騰達行與原廠討論後,他們也找了作者討論,並提供幾個觀點如下: (1) 研究團隊使用的軟體版本為舊版,新版分析軟體有經過修正。 (2) TEM 需要將樣本脫水,所以粒子大小會與溶於 buffer 中的小很多。 (3) 研究團隊表示,exosomes 的濃度特性較大小特性來的有意義,因此 Particle Metrix 的綜合評分仍較高