轉錄因子活性研究

 

1. Electrophoretic mobility shift assay (EMSA)

原理:

將 Biotin 標定一段含有欲探測序列的 probe,和含有欲測細胞核蛋白質萃取液反應後,反應物進行電泳,未形成 TFs-probe 複合體在膠體中移動得較快;反之,形成 TFs-probe 複合體移動得較慢,由膠體上可以看出兩者的差異,圖中標示的「shift」。如果想要了解與 probe 結合的是哪些蛋白質,可以在電泳之前,先以抗體加入反應,如果此抗體與 TFs-probe 結合, Ab-TFs-probe 複合體在膠體中的移動速度,移動速度會更慢於 TFs-probe 複合體,如圖中標示的「supershift」,以此確定 TFs-probe 複合體其中一種蛋白質成份。

試驗終點以化學冷光偵測,取代傳統法同位素標定,安全無虞

高靈敏度,低背景值

操作時間短,一天內完成

提供一百多種 biotin-labeled TF probes 選擇

kit 內含 NB membrane 以及反應所需試劑,無須額外購買

 

 

 

2. TF Filter Plate Assay

原理:

多種樣本之細胞核蛋白質萃取液與欲探測序列的 probe 反應,經 wash 步驟將未形成 TFs-probe 複合體移除,最後將濾膜上的 TFs-probe 複合體沖提至 96 孔盤進行反應呈色。

 

Signosis 獨家設計,高通量分析:96-well plate,同時觀察多種樣本 TF 活性

 

 

 

3. TF ELISA kit

ELISA-like 型式,可選擇 Colorimetric method 或 Chemiluminescent method,3.5 小時得到數據